蛋白质、多肽液相色谱纯化方法介绍
蛋白质的分离纯化工作较为复杂,从细胞中提取的蛋白质或从含有蛋白质的溶液中经过沉淀、梯度离心、盐析等方法得到的蛋白质经常含有杂质,要去除这些杂质,同时又要保持蛋白质的生物学活性,如酶的催化活性,就需要
插入氨基酸可将生物多肽活性提高40倍
瑞士洛桑联邦理工学院的科学家日前人工合成出一种氨基酸,能塑造活性多肽的结构并增强其疗效。实验显示,将这种氨基酸插入具有生物活性的多肽,能将其活性提高40倍以上。借助此项成果有望开发出一系列全新的药物
过表达
过表达(Over-Expression,OE)是上调基因表达最常用的方法,其基本原理是将目的基因的编码区(coding sequence,CDS)构建到质粒或病毒载体中,导入细胞内使基因的表达量增加。
酵母双杂交/酵母单杂交/文库构建/文库筛选
酵母双杂交系统是目前最为广泛的一种蛋白质相互作用研究方法,其中,从cDNA文库中筛选出与已知蛋白存在特异相互作用的蛋白是酵母双杂交系统最为重要和广泛的用途。
基因克隆
在体外将各种来源的遗传物质和载体DNA相结合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子,继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞,再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子
多肽合成:酶法优于化学法
多肽是由氨基酸残基通过肽键连接形成的一类化合物,具有广泛的生物活性,一些甜味剂,毒素,抗生素也为多肽类化合物。抗原肽化学法合成多肽需要经过四个步骤:1. 保护非反应性集团,2. 活化羧基,3. 形成